光谱仪的原理以及操作方法

分光光度计又称光谱仪，是将成分复杂的光分解成谱线的科学仪器。测量范围一般包括波长范围为380~780 nm的可见光区和波长范围为200~380 nm的紫外光区。不同的光源有各自的发射光谱，因此可以使用不同的发光体作为仪器的光源。钨灯发射光谱:钨灯光源发出的波长为380 ~ 780 nm的光谱光经棱镜折射后，可得到由红、橙、黄、绿、蓝、靛、紫组成的连续色谱图；这种色谱可用作可见光分光光度计的光源。

仪器组成

分光光度计已经成为现代分子生物学实验室的常规仪器。它通常用于核酸、蛋白质和细菌生长浓度的定量。

该仪器主要由光源、单色仪、样品室、探测器、信号处理器和显示存储系统组成。

原则:

分光光度计使用一个可以产生多种波长的光源，通过一系列分光计，产生特定波长的光源。光线通过被测样品后，部分光线被吸收，计算出样品的吸收值，换算成样品的浓度。样品的吸光度与样品的浓度成正比。

单色光辐射通过被测物质溶液时，被物质吸收的量与物质浓度和液层厚度(光程长度)成正比，关系如下:

A=-lg(I/I0)=-lgT=kLc

其中:a为吸光度；

I0是入射单色光的强度；

I是透射的单色光强度；

t是物质的透射比；

k是摩尔吸收系数；

l是分析物的光程，即比色皿的边长；

c是物质的浓度；

光的选择性吸收波长和相应的吸收系数是材料的物理常数。当某一纯物质在一定条件下的吸收系数已知时，可以将样品在相同条件下配制成溶液，测定其吸收，这样就可以通过上式计算出样品中该物质的含量。在可见光区，除了一些吸收光的物质外，许多物质本身并不吸收光，而是在一定条件下加入显色剂或处理使其显色后才能测定，所以也叫比色分析。由于影响显色深度的因素很多，且经常使用单色光纯度差的仪器，因此在测定时应同时使用标准品或对照品。

操作方法:

1.打开电源，打开仪器开关，提起样品室的黑箱盖，预热10分钟。

2.将灵敏度开关调整到“1”位置(如果零点调节器不能调整到“0”，则需要选择* * *。)

3.根据所需波长转动波长选择按钮。

4.将空白溶液和测量溶液分别倒入比色皿的3/4，用镜面擦拭纸擦去外壁，放入样品室，使空白管对准光路。

5.在黑箱盖打开的情况下调节零位调节器，使读数盘的指针指向t=0。

6.盖上黑箱盖，调节“100”调节器使空白管的t=100，指针稳定后逐渐拉出样品滑块，分别读出测量管的光密度值，并记录。

7.比色后，关闭电源，取出比色皿清洗，用软布或纸擦拭样品室。