分配色谱法
这种色谱的流动相和固定相都是液体,样品分子在两个液相之间很快达到平衡分布。这种分离类似于萃取过程,是利用各组分在两相中分配系数的差异来实现的。
常用的固定剂有β,β’-双氧(ODPN)、聚乙二醇(PEG400~4000)、三亚甲基二醇(TMG)和角鲨烷(SQ)。使用与气相色谱相同的方法,将固定液涂在多孔载体表面,但在使用中容易流失。目前,键合固定相被广泛应用。在这种固相中,固定液没有涂覆在载体的表面上,而是通过化学反应将有机基团结合到纯硅胶颗粒的表面上。
例如,可以通过氯十八烷基硅烷和硅胶表面上的羟基(-OH)之间的反应形成烷基化表面。这种固定液的优点是不容易被流动相侵蚀。在分配色谱中,流动相可以是纯溶剂,也可以用混合溶剂进行梯度洗脱,其极性应与固定液不同,以避免两者之间的相容性。
液相色谱所用的基本理论:塔盘理论和速率方程与气相色谱基本相同,但由于气相色谱是用液体代替气体作为流动相,所以液体和气体的性质是不同的。
液相色谱中使用的保留值、塔板数、塔板高度、分离度和选择性等基本概念与气相色谱中使用的基本概念一致。
高效液相色谱仪的构建
高效液相色谱系统主要由流动相储液瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成。其整体组成与气相色谱相似,但根据流动相为液体的特点做了很多调整。HPLC的输液泵要求输液量恒定稳定,采样系统要求采样方便,切换严格。同时,由于液体流动相的粘度远高于气体,为了降低柱压,HPLC的色谱柱一般较粗,长度也远小于气相色谱柱。