PCR反应过程有以下三个步骤:
1.恶化
将反应体系混合物短时间(约15 s-30 s)加热至94℃,使靶DNA双螺旋的氢键断裂,形成单链DNA作为反应模板。
2.热处理
将反应体系冷却至特定温度(引物的TM值约为或低于该温度),引物与DNA模板的互补区结合形成模板引物复合物。
3.延长
将反应体系的温度升至72℃并保持一段时间。在耐热聚合酶的作用下,以引物为固定起点,以四种单核苷酸(dNTP)为底物,合成新的DNA链。
以上三个步骤重复为一个循环,每个循环的乘积作为下一个循环的模板。如此循环数十次,使目的基因成倍扩增,达到检测或获取基因的目的。