实验室人员是检测工作的主力军。既要保证检测结果的有效性，又要时刻面临感染的风险。摘要:本文从生理特性、荧光PCR原理、PCR实验室准备规范、样本检测操作、实验室数据分析和常见问题分析等方面阐述了“PCR实验室检测注意事项”。
1、传染源
目前传染源主要是感染病人。无症状感染者也可能成为传染源。
2.传输路由
通过呼吸道飞沫和密切接触传播是主要传播途径。在相对封闭的环境中长期接触高浓度气溶胶的情况下，有可能通过气溶胶传播。由于可在粪便和尿液中分离，应注意粪便和尿液对环境的污染造成的气溶胶或接触传播。
3.荧光PCR原理
重复变性-退火-延伸这三个过程，模板DNA的量会成倍增加。理论上n次循环后，模板量会达到2的n次方。
4.常见问题分析
(1)试剂已经翘了，如何处理？
答:如果是单信道，无论是FAM还是VIC信道，都要按要求复检。如果不方便重新取样，建议重新提取原样品进行验证。如果复检是阴性，如果复检还是同一个渠道，就要仔细复查结果。首先，必须消除实验室污染。二是要了解清楚患者信息，查看临床症状和接触史。如果无法确认，建议重新采样。如果出现大量弱阳性扩增尾，首要原因是考虑实验室污染，可以通过做环境样本和阴性对照来验证和排除。
②N基因和1ab基因是地方性的吗？哪个更敏感？会和其他剪辑重叠吗？
答:N基因和1ab都是特异性的，不会与其他呼吸道病原体发生交叉反应。设计的时候，两个基因的序列不一样，导致敏感度不一样。N基因的敏感性高于1ab。
③检验结果与临床诊断不符。如何解读它们？
答:因为是RNA病毒，所以很容易降解。此外，测试结果还与取样、提取和样品本身的浓度有关。需要逐一分析，结合临床症状才能解读。
④以生理盐水为阴性对照，内标也会升高。这怎么解释？
答:由于试剂是内源性内标，而内源性内标标记了一种人源基因，存在于人的表皮细胞中，操作过程中可能出现人源污染，环境污染也可能导致内标升高，这也是上面提到的环境样本质控的建议。
⑤样品内部没有标注怎么办？
答:如果没有找到样品的内标，必须对样品进行复验，样品可以重新混合。如果重新抽取后仍未找到样品的内标，则在排除抽取问题的情况下，采样不合格，应通知临床重新采样进行复检。
⑥收集环境样本检测类病毒。为什么大部分样本不能内部标记，偶尔个别样本可以内部标记？
答:因为试剂检测的是人体内源性内标，环境样本一般不含人体细胞，所以无法检测到内标；偶尔会检测到内标，这可能是由于人源细胞粘附在环境样品上。
