在细胞培养技术中，细胞计数是一项基本技能，对于规范培养条件和需要量化的实验至关重要。本文介绍了用血细胞计数器计数细胞的经典方法和一些需要注意的细节。
细胞悬液的制备:
对于贴壁细胞，我们需要用胰蛋白酶消化，使细胞从培养皿表面脱落。
根据需要，加入适当体积的培养基来中和和稀释细胞，以获得均质的细胞悬液。要求尽量吹净细胞，不要留下任何细胞团。
准备血细胞计数器:
用70%乙醇清洁盖玻片和血细胞计数器。
将盖玻片弄湿(用水或呼吸，使盖玻片与血细胞计数器接触更紧密，更容易粘在一起)，盖在血细胞计数器上。
台盼蓝染色(可选):
如果有必要计算细胞活力，则有必要将细胞悬液与等体积的0.4%台盼蓝混合。
室温孵育3-5分钟，使台盼蓝进入死细胞，使死细胞呈蓝色。
血细胞计数器加载:
用移液管将细胞悬液或细胞/台盼蓝混合溶液滴到血细胞计数器的计数池边缘。此时，液滴会在虹吸作用下进入盖玻片下的计数池。
同样，细胞悬浮液也被添加到另一侧的计数池中。
将计数板放置几分钟，使细胞散开，同时用吸水纸吸收多余的液体。
细胞计数:
在100倍的显微镜下，移动计数板将视场对准计数板的中央大正方形，四周是一圈三条平行线，中间是密密麻麻的网格。中央的正方形区域几乎可以填满整个视野。
用手持计数器记录计数池四个角和中央方格的细胞数(位置1-5，经典电流-协议建议每个方格的细胞数不大于20-50)，重复记录另一侧计数池的细胞数，共计十个方格。计数方法是只计数被上下两条线压住的细胞，不计数被上下两条线压住的细胞(如下图所示，总的原则是“数而不数，数左而不数右”，判断标准是是否触及三条边线的中线)。如果有多个单元格未被吹成一组，则只能记录为一个单元格。如果有很多肿块，可能需要重新吹甚至消化，直到大部分细胞都是单细胞。