1凯氏定氮仪的工作原理和结构
凯氏定氮仪是根据凯氏定氮法设计的仪器,主要用于测定混合物和化合物中的总氮含量。在现有的催化剂条件下,使用液体标准即可完成测定,通过计算耗酸量即可计算出样品中的氮含量。因为蛋白质中氮含量系数的计算是相对恒定的,所以用氮含量乘以换算系数就可以得到蛋白质的总含量,这是蛋白质定量测定的经典方法。
1.1消化
(见图1)作为更传统的凯氏消化和蒸馏装置。通过在烧瓶中混合和添加样品,证明样品可以被渗透。置于烧瓶中预热至420℃消解装置中,直至烧瓶中的消解液呈透明清澈的蓝绿色,继续加热0.5-1小时,转化样品中存在的有机氮,直至生成无机氮-铵[3]。
1.2蒸馏
把消化液取下来,放凉。加入50毫升水中后,称取50毫升加入接收瓶中,然后加入混合指示剂。蒸馏装置连接后,将5mL的过量溶液加入消化瓶中,可中和成为所需用途,然后开始蒸馏过程。将消化液中的铵银转化为氮馏出物,可被过量吸收[4]。
1.3滴定和计算
用酸性标准溶液滴定洗手液至终点,洗手液中氮和蛋白质含量的计算公式如下[5]:
其中:氮含量用n表示;滴定样品所需的标准酸溶液的体积用V1表示;滴定空白所需的标准酸溶液用V0表示;校准时的溶液浓度用c表示;样品的质量用m表示;样品消化液的总体积用v表示;样品中消化液蒸馏所需的体积用v表示。
计算后,将氮含量乘以不同样品类型对应的氮换算成的蛋白质系数,即可得到蛋白质含量。