基于滤膜直接细菌计数的细菌总数快速检测
[摘要]细菌总数的快速检测在质量监控中具有重要意义。目前除了经典的平板培养法，还有微菌落法、阻抗法等快速检测方法，这些方法要么检测时间长，要么检测成本高。本研究提出了一种无需培养直接计数滤膜上细菌总数的快速检测方法，主要分为过滤、染色、显微镜计数和计算四个步骤。在计算细菌总数时，根据滤膜上细菌的分布特点，对传统公式进行了改进，提出了按区域计算细菌总数的计算方法，提高了检测精度。结果表明，该方法与传统平板培养法无显著差异(t=0.847， p = 0.436 > 0.05)，是一种低成本、快速检测细菌总数的方法。
1导言
有许多关于细菌总数的研究。目前国家标准规定的方法是平板计数法，即在样品中加入琼脂营养培养基，在37℃下24 ~ 48 h后计数。这种方法精度高，但耗时长，难以满足实际工作需要。为了简化检测程序，缩短检测时间，国内外学者对快速检测方法做了大量研究，提出了一些检测方法，如阻抗检测法[1]、SIMPLETTM全平皿计数法[2]、微菌落技术[3-5]和纸片法[6-7]，取得了一些成果，但检测时间仍在4小时以上。
本研究在分析现有研究成果的基础上，提出了滤膜染色后直接检测细菌总数的方法。具体步骤如下:用细菌收集器收集细菌→膜上染色→油镜下计数→根据公式计算菌液浓度。实验结果表明，该方法与传统平板培养法无显著差异，检测时间约为1 h，是一种快速检测细菌总数的方法。
2材料和方法
2.1材料
本研究使用的实验材料为细菌收集器(杭州泰林生物技术设备有限公司)、染料、生物显微镜(宁波永新光学有限公司)和聚碳酸酯膜(直径47 mm)。
2.2实验方法
2.2.1准备工作取下集菌器的滤网(见图1)，统计滤网上的总孔数，为计算菌液浓度做准备。此外，还需要对集菌器中的集菌器进行高压灭菌，防止过滤过程中引入外来细菌。
2.2.2细菌收集300 ~ 500ml浓度的菌液，置于细菌收集器上，通过蠕动加压对菌液施加压力，使菌液流经孔径为0.45um的聚碳酸酯膜..采用过滤法是因为可以使细菌在滤膜上分布比较均匀，而选择聚碳酸酯膜是因为其透光性好，便于用显微镜观察。
2.2.3染色集菌后取下滤膜，切下一部分放在载玻片上染色固定。染色的目的是增加细菌与背景的对比，便于观察。