近年来，市场上出现了许多自动细胞计数器。这种仪器使用了光学显微镜技术，但它带来了更高的精度和可重复性，并将这种单调的工作自动化。小样本量也是这种细胞计数器的另一个优点。许多仪器使用一次性载玻片，只需要10-20 uL样品。将载玻片插入自动细胞计数器，相机会捕捉图像。然后内置软件分析图像，显示细胞数量等信息。
在这里，专家介绍了使用自动细胞计数器的三个技巧。
精确聚焦
与其他光学显微镜一样，仪器的精确对焦对于计数非常重要。手动计数时，训练有素的大脑可以轻松识别细胞。但是，自动细胞计数器中的摄像头会检测活细胞的亮中心和暗边缘，并将其处理为黑白像素信息。如果细胞聚焦不准，亮中心会有明显的灰度，会被误认为死细胞。
大多数研究人员会发现，聚焦并不难，只要屏幕上显示的图像质量与传统显微镜相似。确保你有一个清晰的形象是很重要的。还有一点就是要了解细胞计数器中摄像头的分辨率。如果自动细胞计数器以低帧速率显示，例如低于每秒15帧，显示的图像将不会实时响应聚焦旋钮的微调。
控制幻灯片之间的差异
大多数基于图像的自动细胞计数器使用具有清晰测量区域的一次性载玻片。该测量区域由物镜的放大率和照相机的图像传感器的尺寸设定。这些细胞计数器通常测量0.4-0.5 uL的样本，相当于4-5个大方块的血细胞计数器。
与血细胞计数器不同，计数载玻片通常只使用一次。因此，载玻片之间的差异会显著影响细胞计数的结果。对于某一组实验，最好使用同一批载玻片，尽量避免这些差异。更改批号时，也建议使用标准微珠检查载玻片。大多数细胞计数器制造商提供已知浓度的标准微珠。使用相同的微球样品检查不同的载玻片有助于发现差异。
评估软件的集群性能
自动细胞计数仪的核心是进行分析的软件，相当于人工计数时的人脑。大多数自动细胞计数器包含集成的软件，可以精确地计数单细胞群体的数量。但是，当涉及到群集细胞的计数时，细胞计数器会有明显的差异。由于培养细胞获得的样本并不总是单细胞群体，有时会有多个细胞团，自动细胞计数器的去团性能也需要仔细评估。当评估聚类性能时，可以执行图1的检测。
图一。将HL-60细胞加热至70 ℃,处理20分钟，并杀死以获得死细胞样品。然后，使用两种不同的自动细胞计数器来检测样品。细胞计数后，根据软件捕捉的图像进行比较。红圈:死细胞；蓝圈:活细胞；黑色圆圈:排除的对象。
自动细胞计数器正在取代繁琐的人工计数方法。了解一些基本原理，全自动细胞计数器会帮你得到好的结果。